快速準(zhǔn)確的分子診斷在生命科學(xué),、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,?；?/span>PCR或下一代測(cè)序技術(shù)的方法具有高準(zhǔn)確度，但存在反應(yīng)耗時(shí)長(zhǎng),、分析程序復(fù)雜,、儀器體積大和依賴專業(yè)人員操作等問(wèn)題,。近年來(lái),，基于規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）/CRIPSR相關(guān)（CRISPR-associated,，Cas）系統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)快速發(fā)展,，由于其具有強(qiáng)特異性和可編程性，且易與現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)監(jiān)測(cè)設(shè)備相結(jié)合,，已在分子診斷領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大潛力,。然而，基于CRISPR/Cas的檢測(cè)方法通常需要核酸靶標(biāo)預(yù)擴(kuò)增步驟來(lái)提高分析物的濃度,，延長(zhǎng)了檢測(cè)時(shí)間,，并增加氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)，從而影響檢測(cè)準(zhǔn)確性,。因此,，各種基于CRISPR/Cas的無(wú)靶標(biāo)擴(kuò)增（amplification-free）檢測(cè)策略被開(kāi)發(fā)出來(lái),，旨在克服上述局限性，最大限度地減少因缺乏預(yù)擴(kuò)增而導(dǎo)致的靈敏度損失,，并利于非核酸靶標(biāo)檢測(cè)和便攜式設(shè)備集成,。
近期，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院-國(guó)家熱帶病研究中心全球健康學(xué)院環(huán)境健康與生態(tài)安全系碩士研究生李慧敏等在Chemical Society Reviews (IF=60.615) 雜志發(fā)表了“Amplification-free CRISPR/Cas detection technology: challenges, strategies, and perspectives”的綜述性文章,，對(duì)基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的無(wú)擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的近期成果進(jìn)行了系統(tǒng)性總結(jié)歸納,，并提出了該領(lǐng)域面臨的挑戰(zhàn)以及未來(lái)展望。
本文首先綜述了基于無(wú)擴(kuò)增的CRISPR/Cas檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀和面臨的挑戰(zhàn),，進(jìn)而重點(diǎn)介紹了提升無(wú)擴(kuò)增CRISPR/ Cas技術(shù)檢測(cè)靈敏度的四種主要策略：優(yōu)化CRISPR/Cas反應(yīng)的關(guān)鍵參數(shù),、數(shù)字化靈敏檢測(cè)平臺(tái)、偶聯(lián)其他靈敏信號(hào)傳感器以及設(shè)計(jì)級(jí)聯(lián)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)輸出信號(hào)放大,。最后,，本文進(jìn)一步討論了基于無(wú)擴(kuò)增CRISPR/Cas檢測(cè)技術(shù)未來(lái)展望，包括實(shí)現(xiàn)各獨(dú)立反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化,、降低檢測(cè)成本,、形成整合的檢測(cè)平臺(tái)以適應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)的需求，以及無(wú)擴(kuò)增靶標(biāo)多重檢測(cè),，這些進(jìn)一步優(yōu)化將有助于開(kāi)發(fā)更有效的生物傳感策略,，使CRISPR/Cas檢測(cè)技術(shù)成為真正理想的分子診斷工具。
上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院-國(guó)家熱帶病研究中心全球健康學(xué)院碩士研究生李慧敏和碩士研究生解藝為共同第一作者,，全球健康學(xué)院殷堃研究員,、胡沁沁副研究員和郭曉奎教授為該論文的共同通訊作者。本研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（22104090）,、上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（22ZR1436200）和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)國(guó)家重大科技基礎(chǔ)設(shè)施（上海）（TMSK-2021-114）的支持,。
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