|
實(shí)驗(yàn)室人員組成： PI：劉俊嶺 副教授：孫雪青、黨素英 副研究員：樊雪梅、徐艷艷 技術(shù)員：張琳 博士后：姜豪杰、孟盼盼 研究生：丁楠、陳琪迪、李琳、楊咪娜、嚴(yán)杰、李果鳴、沈穎芝、王新夏、丁晨、孫惠炎
研究方向及興趣：
1. 粘附受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)在血小板激活中的作用。
2. 動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機(jī)制。
3. 基質(zhì)細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的作用研究。
研究進(jìn)展：
1. 發(fā)現(xiàn)膠原受體GPVI介導(dǎo)的血小板活化新調(diào)控機(jī)制
膠原受體GPVI作為血小板表面一種重要的粘附受體，能夠通過(guò)與具有免疫受體酪氨酸活化基序的FcRγ-chain偶聯(lián)，介導(dǎo)胞內(nèi)活化信號(hào)參與血栓止血、炎癥等生理病理過(guò)程。從目前的研究結(jié)果上看，GPVI活化血小板主要通過(guò)以下幾個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：磷脂酶C（PLC）/PKC通路、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3-K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）通路、絲裂原激活的蛋白激酶（MAPK）通路等。其中PI3K/Akt通路在GPVI介導(dǎo)的血小板活化中起到了關(guān)鍵性作用。PTEN作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有雙重特異性磷酸酶活性的腫瘤抑制基因，其不僅有脂質(zhì)磷酸酶活性，還有蛋白磷酸酶活性，可負(fù)性調(diào)控三條途徑（PI3K/AKT信號(hào)通路，粘附斑激酶FAK途徑；細(xì)胞分裂素激活的蛋白激酶MAPK途徑）來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡、粘附和遷移等。但是PTEN在巨核細(xì)胞分化以及血小板活化中的功能尚不清楚。我們利用PCR和免疫印跡技術(shù)，首次發(fā)現(xiàn)PTEN能夠在血小板中高表達(dá)；通過(guò)對(duì)造血系特異的PTEN基因敲除小鼠進(jìn)行表型分析，發(fā)現(xiàn)PTEN缺失會(huì)促進(jìn)巨核細(xì)胞的分化成熟造成血液中血小板數(shù)量明顯升高；小鼠尾部出血時(shí)間也明顯縮短。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)PTEN缺失能夠上調(diào)膠原引起的血小板聚集和分泌；對(duì)膠原受體GPVI介導(dǎo)的血小板活化信號(hào)通路進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)PTEN參與GPVI介導(dǎo)的血小板活化依賴(lài)于Src家族激酶，但其調(diào)控下游信號(hào)分子的機(jī)制雜較為復(fù)，可以通過(guò)PI3K/Akt通路依賴(lài)和非依賴(lài)兩種方式發(fā)揮作用。該項(xiàng)研究成果有助于解釋血小板增多癥以及彌散性血栓的發(fā)生機(jī)制，并且對(duì)非依賴(lài)信號(hào)通路進(jìn)行分析，還有可能揭示出一種廣泛的全新的PTEN調(diào)控模式。該項(xiàng)研究成果發(fā)表于2010年10月7日刊的Blood上（Blood. 2010;116（14）:2579-81.）。
圖1 PTEN調(diào)節(jié)膠原引起的血小板活化的機(jī)制。（PTEN: not just a tumor suppressor. Blood, October 7, 2010; 116（14）: 2404-5）
GPVI與血小板另一重要受體C-型凝集素樣受體2（CLEC-2）通過(guò)極為相似的信號(hào)途徑導(dǎo)致血小板活化，而CLEC-2受體能夠與淋巴管特定時(shí)段表達(dá)的Podoplanin結(jié)合活化血小板，這一過(guò)程在淋巴管發(fā)育過(guò)程中極為重要；此外，血小板GPVI介導(dǎo)信號(hào)通路又與T細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑極為相似，因而該項(xiàng)研究成果對(duì)于闡述PTEN調(diào)控淋巴管發(fā)育閉合以及T細(xì)胞分化成熟的新機(jī)制具有重要借鑒作用。有鑒于該發(fā)現(xiàn)的重要性，在同期Blood上，編輯高度評(píng)價(jià)了我們的工作（題為：PTEN: not just a tumor suppressor. Blood, October 7, 2010; 116（14）: 2404-5），認(rèn)為我們發(fā)現(xiàn)豐富了血小板活化的分子調(diào)控理論，并為研究PTEN的生物學(xué)調(diào)控機(jī)制開(kāi)創(chuàng)了一個(gè)新領(lǐng)域。
2. 血小板P2Y12受體參與肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成的機(jī)制研究
動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病。血小板作為一類(lèi)重要的血細(xì)胞，通過(guò)釋放炎癥因子和表達(dá)粘附分子，在粥樣硬化斑塊部位招募和錨定炎癥細(xì)胞，因此是動(dòng)脈粥樣硬化惡化發(fā)展的重要因素。P2Y12是血小板表面主要的ADP受體，是血小板活化信號(hào)的重要放大子，其拮抗劑如氯吡格雷（Clopidogrel，Plavix）和普拉格雷（Prasugrel，Efient，2009年FDA批準(zhǔn)上市)在臨床被廣泛應(yīng)用于心肌梗死和急性冠脈綜合征。大量臨床研究表明，服用氯吡格雷后病人血漿中的CD40L，C反應(yīng)蛋白等與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)的多種炎癥因子的水平明顯下降，這提示我們P2Y12可能在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。我們利用P2Y12和ApoE基因敲除小鼠高脂飲食模型開(kāi)展研究，發(fā)現(xiàn)P2Y12和ApoE雙敲除小鼠的動(dòng)脈粥樣斑塊明顯小于ApoE敲除小鼠，并且斑塊中膠原成分增多，而巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減少，同時(shí)血漿中血小板為唯一來(lái)源的趨化因子PF4的水平明顯降低。通過(guò)骨髓移植實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)P2Y12是血小板參與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵調(diào)控因素。在體外實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)血小板缺失P2Y12會(huì)造成其alpha顆粒釋放多種趨化因子的能力以及P-選擇素的表達(dá)明顯受到抑制，血小板趨化單核細(xì)胞的能力也相應(yīng)地減弱。此外，單獨(dú)使用PKA抑制劑（PKI）就能夠直接引起野生型和缺失P2Y12的血小板alpha顆粒釋放。因此，我們推斷P2Y12通過(guò)cAMP-PKA信號(hào)通路調(diào)控血小板的alpha顆粒中炎性因子如PF4的釋放，以及P-selectin表達(dá)等，進(jìn)而調(diào)控炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞在斑塊部位的募集和浸潤(rùn)。我們的研究表明抑制血小板ADP受體P2Y12是預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)新靶點(diǎn)，并為拓展應(yīng)用氯吡格雷和普拉格雷提供理論依據(jù)。我們受邀在美國(guó)舉行第52屆美國(guó)血液學(xué)年會(huì)上（佛羅里達(dá)州奧蘭多市，2010年12月），作了大會(huì)報(bào)告（Oral Presentation），匯報(bào)了該項(xiàng)研究成果，并且該工作的主要完成人李定博士還獲得大會(huì)獎(jiǎng)勵(lì)（見(jiàn)附件）。目前，我們已將部分研究結(jié)果投遞到The Journal of Clinical Investigation雜志進(jìn)行同行評(píng)閱。
3. 發(fā)現(xiàn)血小板是肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的重要基質(zhì)細(xì)胞
腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的首因，腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程需要形成轉(zhuǎn)移微環(huán)境。近來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移前還會(huì)先在靶器官形成由骨髓來(lái)源細(xì)胞（BMDC）組成的預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境，協(xié)助腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境的形成機(jī)制是目前一個(gè)研究熱點(diǎn)。血小板參與血栓止血過(guò)程，并作為一種重要基質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)其表面的黏附分子以及α-顆粒釋放的活性成分，在腫瘤轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié)上發(fā)揮重要作用。血小板是否參與腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境的形成，尚無(wú)任何文獻(xiàn)報(bào)道。近來(lái)，我們研究發(fā)現(xiàn)血小板粘附受體GPIb-IX-V（PNAS 2007;104(21):9024-8.）和GPCR之一P2Y12基因敲除小鼠肺癌轉(zhuǎn)移灶明顯少于對(duì)照組小鼠；通過(guò)免疫組化、熒光分析，發(fā)現(xiàn)P2Y12敲除能夠抑制VEGFR1+ BMDC細(xì)胞在肺部的募集。圍繞這些發(fā)現(xiàn)，我們將繼續(xù)利用基因敲除小鼠模型，對(duì)血小板多種黏附受體以及α-顆粒釋放在肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的作用機(jī)制展開(kāi)研究，并考察基于不同作用機(jī)制的抗血小板藥物對(duì)肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成的影響。該項(xiàng)研究有助于理解腫瘤轉(zhuǎn)移病理過(guò)程，有助于臨床治療惡性腫瘤。
|
