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實驗室人員組成： PI：劉俊嶺 副教授：孫雪青、黨素英 副研究員：樊雪梅、徐艷艷 技術(shù)員：張琳 博士后：姜豪杰,、孟盼盼 研究生：丁楠、陳琪迪,、李琳、楊咪娜,、嚴(yán)杰,、李果鳴、沈穎芝,、王新夏,、丁晨、孫惠炎
研究方向及興趣：
1. 粘附受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)在血小板激活中的作用,。
2. 動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機制,。
3. 基質(zhì)細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的作用研究。
研究進(jìn)展：
1. 發(fā)現(xiàn)膠原受體GPVI介導(dǎo)的血小板活化新調(diào)控機制
膠原受體GPVI作為血小板表面一種重要的粘附受體,，能夠通過與具有免疫受體酪氨酸活化基序的FcRγ-chain偶聯(lián)，介導(dǎo)胞內(nèi)活化信號參與血栓止血,、炎癥等生理病理過程,。從目前的研究結(jié)果上看，GPVI活化血小板主要通過以下幾個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：磷脂酶C（PLC）/PKC通路,、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3-K）/蛋白激酶B（protein kinase B,，Akt）通路、絲裂原激活的蛋白激酶（MAPK）通路等,。其中PI3K/Akt通路在GPVI介導(dǎo)的血小板活化中起到了關(guān)鍵性作用,。PTEN作為第一個被發(fā)現(xiàn)的具有雙重特異性磷酸酶活性的腫瘤抑制基因，其不僅有脂質(zhì)磷酸酶活性,，還有蛋白磷酸酶活性,，可負(fù)性調(diào)控三條途徑（PI3K/AKT信號通路，粘附斑激酶FAK途徑,；細(xì)胞分裂素激活的蛋白激酶MAPK途徑）來調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長,、增殖、分化,、凋亡,、粘附和遷移等。但是PTEN在巨核細(xì)胞分化以及血小板活化中的功能尚不清楚,。我們利用PCR和免疫印跡技術(shù),，首次發(fā)現(xiàn)PTEN能夠在血小板中高表達(dá)；通過對造血系特異的PTEN基因敲除小鼠進(jìn)行表型分析，發(fā)現(xiàn)PTEN缺失會促進(jìn)巨核細(xì)胞的分化成熟造成血液中血小板數(shù)量明顯升高,；小鼠尾部出血時間也明顯縮短,。同時還發(fā)現(xiàn)PTEN缺失能夠上調(diào)膠原引起的血小板聚集和分泌；對膠原受體GPVI介導(dǎo)的血小板活化信號通路進(jìn)行分析,，發(fā)現(xiàn)PTEN參與GPVI介導(dǎo)的血小板活化依賴于Src家族激酶,，但其調(diào)控下游信號分子的機制雜較為復(fù)，可以通過PI3K/Akt通路依賴和非依賴兩種方式發(fā)揮作用,。該項研究成果有助于解釋血小板增多癥以及彌散性血栓的發(fā)生機制,，并且對非依賴信號通路進(jìn)行分析，還有可能揭示出一種廣泛的全新的PTEN調(diào)控模式,。該項研究成果發(fā)表于2010年10月7日刊的Blood上（Blood. 2010;116（14）:2579-81.）,。
圖1 PTEN調(diào)節(jié)膠原引起的血小板活化的機制。（PTEN: not just a tumor suppressor. Blood, October 7, 2010; 116（14）: 2404-5）
GPVI與血小板另一重要受體C-型凝集素樣受體2（CLEC-2）通過極為相似的信號途徑導(dǎo)致血小板活化,，而CLEC-2受體能夠與淋巴管特定時段表達(dá)的Podoplanin結(jié)合活化血小板,，這一過程在淋巴管發(fā)育過程中極為重要；此外,，血小板GPVI介導(dǎo)信號通路又與T細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號途徑極為相似,，因而該項研究成果對于闡述PTEN調(diào)控淋巴管發(fā)育閉合以及T細(xì)胞分化成熟的新機制具有重要借鑒作用。有鑒于該發(fā)現(xiàn)的重要性,，在同期Blood上,，編輯高度評價了我們的工作（題為：PTEN: not just a tumor suppressor. Blood, October 7, 2010; 116（14）: 2404-5），認(rèn)為我們發(fā)現(xiàn)豐富了血小板活化的分子調(diào)控理論,，并為研究PTEN的生物學(xué)調(diào)控機制開創(chuàng)了一個新領(lǐng)域,。
2. 血小板P2Y12受體參與肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成的機制研究
動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病。血小板作為一類重要的血細(xì)胞,，通過釋放炎癥因子和表達(dá)粘附分子,，在粥樣硬化斑塊部位招募和錨定炎癥細(xì)胞，因此是動脈粥樣硬化惡化發(fā)展的重要因素,。P2Y12是血小板表面主要的ADP受體,，是血小板活化信號的重要放大子，其拮抗劑如氯吡格雷（Clopidogrel,，Plavix）和普拉格雷（Prasugrel,，Efient，2009年FDA批準(zhǔn)上市)在臨床被廣泛應(yīng)用于心肌梗死和急性冠脈綜合征,。大量臨床研究表明,，服用氯吡格雷后病人血漿中的CD40L，C反應(yīng)蛋白等與動脈粥樣硬化密切相關(guān)的多種炎癥因子的水平明顯下降,，這提示我們P2Y12可能在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,。我們利用P2Y12和ApoE基因敲除小鼠高脂飲食模型開展研究,，發(fā)現(xiàn)P2Y12和ApoE雙敲除小鼠的動脈粥樣斑塊明顯小于ApoE敲除小鼠，并且斑塊中膠原成分增多,，而巨噬細(xì)胞浸潤減少,，同時血漿中血小板為唯一來源的趨化因子PF4的水平明顯降低。通過骨髓移植實驗進(jìn)一步證實P2Y12是血小板參與動脈粥樣硬化的關(guān)鍵調(diào)控因素,。在體外實驗中,，我們發(fā)現(xiàn)血小板缺失P2Y12會造成其alpha顆粒釋放多種趨化因子的能力以及P-選擇素的表達(dá)明顯受到抑制，血小板趨化單核細(xì)胞的能力也相應(yīng)地減弱,。此外,，單獨使用PKA抑制劑（PKI）就能夠直接引起野生型和缺失P2Y12的血小板alpha顆粒釋放。因此,，我們推斷P2Y12通過cAMP-PKA信號通路調(diào)控血小板的alpha顆粒中炎性因子如PF4的釋放,，以及P-selectin表達(dá)等，進(jìn)而調(diào)控炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞在斑塊部位的募集和浸潤,。我們的研究表明抑制血小板ADP受體P2Y12是預(yù)防和治療動脈粥樣硬化的一個新靶點,，并為拓展應(yīng)用氯吡格雷和普拉格雷提供理論依據(jù)。我們受邀在美國舉行第52屆美國血液學(xué)年會上（佛羅里達(dá)州奧蘭多市,，2010年12月）,，作了大會報告（Oral Presentation），匯報了該項研究成果,，并且該工作的主要完成人李定博士還獲得大會獎勵（見附件）,。目前，我們已將部分研究結(jié)果投遞到The Journal of Clinical Investigation雜志進(jìn)行同行評閱,。
3. 發(fā)現(xiàn)血小板是肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的重要基質(zhì)細(xì)胞
腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的首因，腫瘤轉(zhuǎn)移過程需要形成轉(zhuǎn)移微環(huán)境,。近來,，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移前還會先在靶器官形成由骨髓來源細(xì)胞（BMDC）組成的預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境，協(xié)助腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,，預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境的形成機制是目前一個研究熱點,。血小板參與血栓止血過程，并作為一種重要基質(zhì)細(xì)胞,，通過其表面的黏附分子以及α-顆粒釋放的活性成分,，在腫瘤轉(zhuǎn)移的多個環(huán)節(jié)上發(fā)揮重要作用。血小板是否參與腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境的形成,，尚無任何文獻(xiàn)報道,。近來，我們研究發(fā)現(xiàn)血小板粘附受體GPIb-IX-V（PNAS 2007;104(21):9024-8.）和GPCR之一P2Y12基因敲除小鼠肺癌轉(zhuǎn)移灶明顯少于對照組小鼠,；通過免疫組化,、熒光分析,，發(fā)現(xiàn)P2Y12敲除能夠抑制VEGFR1+ BMDC細(xì)胞在肺部的募集。圍繞這些發(fā)現(xiàn),，我們將繼續(xù)利用基因敲除小鼠模型,，對血小板多種黏附受體以及α-顆粒釋放在肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成中的作用機制展開研究，并考察基于不同作用機制的抗血小板藥物對肺癌預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境形成的影響,。該項研究有助于理解腫瘤轉(zhuǎn)移病理過程,，有助于臨床治療惡性腫瘤。
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